Основные характеристики ВИЧ и СПИДа

Не менее опасным и сложным для определения является так называемая «чума XX века» – СПИД. Поэтому анализы на РВ и ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) часто назначаются одновременно и являются частью многих комплексных и скрининговых исследований.

Современная медицина выделяет две разновидности вируса – ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Заражение происходит чаще всего через половой контакт и парентерально (через кровь), а также от больной матери при родах или грудном вскармливании. Первые признаки инфекции обычно появляются через несколько недель и могут включать:

• повышение температуры;
• общую слабость и недомогание;
• сыпь на коже;
• диарею и снижение аппетита;
• увеличение лимфоузлов.

Через некоторое время эти симптомы могут исчезнуть, и заболевание может протекать скрыто, что приводит к ошибочному мнению о выздоровлении. Однако вирус продолжает действовать, постепенно разрушая иммунную систему, что лишает организм защиты от инфекций.

В результате больной становится восприимчивым даже к возбудителям, которые не представляют угрозы для здоровых людей. Скрытый период может длиться до 8–10 лет, и узнать о заболевании можно только сдав кровь. Большинство ВИЧ-инфицированных не подозревают о своем заражении, и СПИД у них развивается гораздо позже.

На последних стадиях ВИЧ переходит в СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита. К этому времени организм практически полностью теряет защитные функции, и даже простое заболевание может привести к серьезным проблемам и смерти. Переход от ВИЧ к СПИДу происходит при значительном снижении уровня CD-4 лимфоцитов. На этой стадии развиваются неизлечимые онкологические и инфекционные процессы, что в конечном итоге приводит к летальному исходу.

Как проводится исследование крови по Вассерману

Реакция Вассермана основана на наличии кардиолипина в белой трепонеме. Этот антиген стимулирует синтез антител, которые выявляются в крови с помощью RW.

В процессе анализа к сыворотке крови пациента добавляют искусственный аналог трепонемы (кардиолипиновый антиген) и связывающий белок (комплимент). Если в крови есть антитела к бледной трепонеме, они связываются с кардиолипиновым антигеном при участии комплемента, что приводит к образованию осадка, оцениваемого как ++++.

В норме в сыворотке здоровых людей происходит гемолиз эритроцитов. Это означает, что антитела отсутствуют, и кардиолипиновый антиген не может взаимодействовать с ними. В результате комплемент участвует в гемолизе, что оценивается как отрицательная реакция Вассермана (“-”).

Анализ крови на реакцию Вассермана имеет пять вариантов ответа:

• – (полный гемолиз эритроцитов, анализ на сифилис отрицателен);
• • (сомнительный результат, слабовыраженная задержка гемолиза);
• ++ (частичная задержка гемолиза, слабоположительная реакция Вассермана);
• +++ (положительная RW, значительная задержка гемолиза);
• ++++ (резко положительная RW, полное отсутствие гемолиза и образование осадка указывает на наличие сифилиса или других заболеваний, вызывающих ложноположительную RW).

Первый ответ указывает на отрицательную RW и не требует дальнейших исследований. Другие результаты следует интерпретировать с осторожностью, так как реакция Вассермана не является высокоточной и специфичной.

При сомнительных, слабоположительных и резко положительных реакциях для уточнения диагноза проводят трепонемные тесты.

Ложноположительные результаты могут возникать из-за употребления жирной пищи, алкоголя, беременности, менструации, малярии, системной красной волчанки и других факторов.

Реакция Вассермана – что это за анализ?

Когда пациенты направляются на анализ крови RW, не все знают, что это за исследование, для чего оно нужно и как проводится. Этот метод диагностики назван в честь немецкого иммунолога Августа Вассермана, который впервые его применил. Поэтому используется аббревиатура RW. Метод основан на реакции гемолиза, по интенсивности которой оцениваются результаты.

Преимуществом анализа является простота его проведения, а главным недостатком — низкая специфичность, что приводит к частым ложноположительным результатам.

Что показывает реакция Вассермана?

Анализ крови на сифилис определяет концентрацию антител к возбудителю болезни в образце крови пациента. В процессе исследования в образец вводят антиген, который реагирует с неспецифическими антителами в организме. По интенсивности реакции оценивают степень поражения.

В зависимости от результата — положительного или сомнительного — можно предположить сроки инфицирования. На 6-8-й неделе болезни реакция положительна у 90% больных, а при вторичном сифилисе — в 98–109% случаев. Реакция Вассермана также используется для оценки эффективности терапии сифилиса.

Когда нужен анализ на реакцию Вассермана?

Анализ крови на реакцию Вассермана обязателен для будущих мам и доноров. Его назначают всем пациентам с подозрением на сифилис.

Анализ входит в список обязательных обследований для следующих категорий работников:

• военнослужащие;
• медработники;
• госслужащие;
• сотрудники общепита.

Другие причины для обследования:

• предстоящая плановая операция;
• симптомы, характерные для сифилиса (длительная лихорадка, увеличение лимфоузлов);
• донорство спермы;
• наркомания;
• контакт с больным сифилисом.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их недостатком является невозможность контроля эффективности лечения, а также получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах. Ложноположительные результаты могут возникать при онкологических заболеваниях, лепре и некоторых эндокринных патологиях. Тесты, такие как РПГА, ИФА и РИФ, могут оставаться положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфичными серологическими реакциями для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции и выявлять поздние формы сифилиса, которые могут протекать с отрицательными результатами. С помощью РИБТ можно распознавать ложноположительные реакции у беременных, что важно для оценки риска инфицирования ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела в сыворотке крови больного обездвиживают бледные трепонемы. Реакция считается отрицательной при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительной — при 21–50%, положительной — при 50–100%. РИБТ может давать ложноположительные результаты. Хотя тест сложный и трудоемкий, он незаменим для дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ показывает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, а также в 94–100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, излучают желто-зеленое свечение в люминесцентном микроскопе. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительна при вторичном и латентном сифилисе, а также в 95–100% случаев при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного исследования проще, чем у РИБТ, но РИФ не может заменить РИБТ из-за меньшей специфичности. Модификация РИФ-10 более чувствительна, а РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы, находясь в присутствии комплемента, прилипают к поверхности эритроцитов. Образовавшиеся комплексы выпадают в осадок при центрифугировании. Чувствительность и специфичность данного теста сопоставимы с РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины классов М и G. Метод IgM – ИФА может использоваться как скрининговый и подтверждающий тест. Чувствительность и специфичность ИФА сопоставимы с РИФ. При сифилисе ИФА показывает положительные результаты с третьего месяца после инфицирования и может оставаться положительным на протяжении всей жизни.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, адсорбировавших антигены бледной трепонемы, склеиваться в присутствии сыворотки больного (гемагглютинация). Этот метод используется для диагностики всех форм сифилиса, включая скрытые. При использовании высококачественного антигена РПГА превосходит другие тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика на дне пробирки свидетельствует о положительной реакции. Если эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки, это указывает на отрицательную реакцию.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Показания к исследованию

Рекомендуется регулярно проходить общий анализ крови для раннего выявления отклонений в организме. Своевременная диагностика позволяет значительно повысить эффективность лечения. Показания для сдачи сыворотки на RW включают:

Расшифровка результатов

Расшифровку результатов анализа выполняет лечащий врач. Результат может быть отрицательным, положительным или спорным. Однако положительная реакция не всегда указывает на наличие заболевания.

RW отрицательная норма

Нормой считается полный гемолиз, то есть разрушение эритроцитов. Если это произошло, реакция считается отрицательной. При расшифровке анализа крови на сифилис (ЭДС) важно помнить, что в первые 2 недели после инфицирования RW будет отрицательной. Исключение составляет скрытый вторичный период, когда результат может временно измениться с положительного на отрицательный.

RW положительная

Положительная реакция обозначается знаком «+». Количество плюсов зависит от вероятности заболевания. При первичном заражении реакция становится положительной на седьмой неделе, а у некоторых пациентов — уже на пятой. При вторичном сифилисе обследование сразу выявляет инфекцию.

Если у пациента скрытый вторичный период, реакция может стать отрицательной, но при рецидиве снова появится осадок, указывающий на наличие болезни. В случае врожденного сифилиса диагностика также покажет положительный результат.

Диагностику проводят для контроля лечения. Иногда, несмотря на терапию, реакция остается положительной. Это явление называется серорезистентным сифилисом. В таких случаях диагностика не позволяет определить, уничтожена ли инфекция, и ее прекращают.

RW ложно положительная

Бывают случаи, когда у человека, не имеющего венерического заболевания, результат обследования оказывается положительным. Это может произойти, если иммунная система начинает атаковать собственные клетки. В таких случаях при диагностике выявляются антитела, характерные для болезни. Это явление называется ложноположительной реакцией Вассермана.

Причинами ложного результата могут быть:

• вирусные и инфекционные заболевания, включая кишечные инфекции и туберкулез, особенно после выздоровления;
• аутоиммунные заболевания;
• воспалительные заболевания сердечно-сосудистой системы;
• сахарный диабет;
• онкологические заболевания;
• третий триместр беременности;
• заболевания кровеносной системы;
• прием некоторых лекарств;
• алкоголизм и наркомания;
• употребление жирной пищи перед сдачей анализа;
• период менструации.

Таким образом, при получении положительного результата на сифилис необходимо исключить возможность ложной реакции и провести дополнительные обследования.

Степень погрешности, насколько точны результаты анализа на сифилис

Примерно у каждого двадцатого человека без проблем со здоровьем может быть ложноположительный результат, а у каждого четвертого зараженного сифилисом — ложноотрицательный. Ложноотрицательные результаты чаще встречаются на начальной стадии болезни, но с прогрессированием вероятность ошибок снижается.

Ложноположительные реакции чаще всего возникают из-за:

1. Употребления алкоголя или жирной пищи перед анализом;
2. Беременности;
3. Наличия туберкулеза или системных заболеваний соединительных тканей;
4. Воспаления легких;
5. Злокачественных процессов в организме;
6. Проблем с печенью;
7. Малярии;
8. Наличия паразитов;
9. Скарлатины;
10. Высокого уровня сахара в крови;
11. Брюшного тифа;
12. Лептоспироза;
13. Менструации.

При выявлении одного из этих факторов рекомендуется повторная сдача анализа. Также следует повторить тест тем, кто после лечения столкнулся с синдромом серорезистентного сифилиса, когда реакция Вассермана отрицательная, но в крови есть антитела к бледной трепонеме.

Если результаты RW-анализа оказались неточными, специалисты рекомендуют использовать усовершенствованный тест RPR, дополненный трепонемными тестами РПГА. Этот метод, быстро набирающий популярность, отличается высокой точностью. Хотя его нельзя считать единственным верным источником информации, он может служить полезным дополнительным инструментом.

Расшифровка

Исследование крови по Вассерману должен расшифровывать квалифицированный врач. Результаты могут быть отрицательными, положительными или промежуточными. Только специалист сможет правильно интерпретировать данные и не пугать пациента раньше времени. Типичный отрицательный результат обозначается знаком «-» и свидетельствует об отсутствии сифилиса в организме.

Положительная реакция

При оценке концентрации антител результат может быть обозначен одним, двумя, тремя или четырьмя плюсами. В расшифровке используются следующие обозначения:

1. «+» и «++» — сомнительная или слабоположительная реакция. Необходимы дополнительные анализы и обследование. Рекомендуется повторить анализ через некоторое время, так как нет полной уверенности в наличии или отсутствии сифилиса. Причиной такого результата могут быть нарушения подготовки перед сдачей крови.

2. «+++» — положительная реакция. Дополнительное подтверждение не требуется, у пациента есть сифилис, и ему необходимо пройти полное обследование. Женщинам назначают мазок из влагалища или матки, мужчины сдают материал из уретры. Такой результат редко бывает ошибочным, но могут назначить уточняющие анализы, если симптомы схожи с другими заболеваниями.

3. «++++» — окончательный положительный результат с высокой интенсивностью реакции.

4. «++++» — окончательная положительная реакция, достоверная на 100% и не требующая дополнительных анализов. Диагноз — сифилис.

Ложноположительная реакции Вассермана

Такой ответ может получить абсолютно здоровый человек по конкретным причинам. Реакция возникает, если у пациента есть острые или хронические заболевания, недавно сделанные прививки или физические травмы. Эти состояния приводят к активной выработке неспецифических белков, известных как антитела или иммуноглобулины. Анализ RW направлен на выявление этих белков и распознает их как сифилитические, что и приводит к ложноположительному результату.

Причины

Выше описаны причины, по которым тест на сифилис может дать ложно положительный результат. Вот список состояний, которые могут к этому привести:

• инфаркт миокарда;
• алкогольное или пищевое отравление;
• острые и хронические заболевания печени, гепатиты D, C, B;
• травмы мягких тканей или костей;
• возрастные изменения в организме;
• туберкулез;
• аутоиммунные заболевания.

Прямые методы. Дань традиции RW продолжается (трепонемные тесты)

Тесты трепонемного происхождения, известные как «RW», значительно продвинулись по сравнению с реакцией Вассермана. Для их проведения используется сложное лабораторное оборудование, включая автоматизированные методы, такие как иммуноблоттинг, ИХЛ и ИФА. В качестве антигена могут использоваться тканевая культура Treponema pallidum, рекомбинантные белки, полученные с помощью генной инженерии, и химически синтезированные пептиды. Однако не все известные тесты применяются в России; предпочтение отдается определенным трепонемным тестам.

РИФ (реакция иммунофлюоресценции) — трепонемный тест, который обнаруживает флюоресцирующие антитела в микроскопическом препарате. Если сыворотка содержит антитела к возбудителю сифилиса, они взаимодействуют с антигенами. Комплекс Treponema + антитела (иммуноглобулины классов M и G) выявляется с помощью антивидовой флюоресцирующей сыворотки и люминесцентной микроскопии.

РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем) — самый специфичный анализ среди тестов RW, существующий уже 70 лет. Несмотря на свою актуальность, его широкому применению мешают высокая стоимость и сложность выполнения. Метод основан на поиске иммобилизинов — антител, которые, взаимодействуя с компонентами комплемента, лишают спирохеты подвижности.

В РИБК используются живые патогенные бактерии, выделенные из крови кроликов, зараженных возбудителем. Подсчет неподвижных форм Treponema pallidum проводится под микроскопом:

• 50–100% иммобилизированных спирохет — положительный результат;
• 31–50% неподвижных бактерий — слабоположительный результат;
• 21–31% неподвижных микроорганизмов — сомнительный результат;
• менее 20% иммобилизированных форм — отрицательный результат.

Результаты оцениваются по интенсивности свечения микроорганизмов. Если сыворотка не содержит противотрепонемных антител, результат будет отрицательным.

РИФ может выявить сифилис на более ранних стадиях, чем RW. Положительный результат наблюдается у большинства пациентов (до 80%) в серонегативный период. Латентный, вторичный, поздний и врожденный сифилис дают положительный ответ практически у всех больных.

РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) основана на агглютинации эритроцитов, адсорбировавших возбудитель сифилиса. Сыворотка человека, у которого уже образовались антитела (IgM и IgG), может склеивать такие эритроциты. РПГА обладает высокой специфичностью (96–100%), хотя чувствительность на ранней стадии болезни составляет около 85%. В случаях вторичного, третичного и скрытого сифилиса чувствительность достигает 99–100%.

ИФА (иммуноферментный анализ) определяет специфические антитела (IgM + IgG) и считается высокочувствительным методом для выявления инфекционного процесса на ранних и поздних стадиях.

Иммуноблоттинг (выявление IgM) — надежный и высокочувствительный тест для диагностики сифилитической инфекции, служащий подтверждающим анализом.

ИХЛ (иммунохемилюминесценционный метод) — автоматизированный тест с чувствительностью 99% и высокой специфичностью, используемый для подтверждения и скрининга трепонемной инфекции.

Общее описание

В крови зараженного человека появляются антитела, выработанные иммунной системой. Возбудитель заболевания — бледная трепонема (Treponema pallidum) — содержит антиген кардиолипин, который вызывает выработку антител, определяемых с помощью реакции Вассермана (RW). Положительная реакция свидетельствует о наличии этих антител в крови и указывает на заболевание.

В реакционно-специфической комплементации (РСК) показателем результата служит реакция гемолиза. В ней участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка, получаемая путем иммунизации кролика эритроцитами барана и инактивируемая при 56°С в течение 30 минут. Результаты РСК оцениваются по наличию или отсутствию гемолиза. Если в испытуемой сыворотке нет сифилитических антител, комплемент идет на реакцию с бараньими эритроцитами, что приводит к гемолизу. При наличии специфических антител комплемент связывается с антигеном, и гемолиза не происходит.

Все ингредиенты для реакции Вассермана берутся в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл. Для фиксации комплемента смесь сыворотки, антигена и комплемента помещают в термостат при 37°С на 45-60 минут (I фаза реакции). Затем добавляют гемолитическую систему (II фаза реакции) и снова помещают в термостат на 30-60 минут. В контрольной пробирке антиген заменяют физиологическим раствором, а вместо исследуемой сыворотки добавляют физиологический раствор. Антигены для реакции Вассермана выпускаются в готовом виде с указанием титра и способа разведения.

Максимальная позитивность реакции обозначается количеством крестов: ++++ (резко положительная) — полная задержка гемолиза; +++ (положительная) — значительная задержка; ++ (слабоположительная) — частичная задержка; + (сомнительная) — незначительная задержка. Отрицательная RW характеризуется полным гемолизом во всех пробирках.

Если врач подозревает ложноположительный результат, он может назначить дополнительные исследования для диагностики заболеваний, передающихся половым путем, включая:

• Сифилис.
• Подозрение на сифилис у контактировавших с больными.
• Беременность.
• Наркотическую зависимость.
• Прерывание беременности.
• Лихорадку с увеличением регионарных лимфатических узлов.
• Первичное посещение поликлиники.
• Поступление в стационар.
• Лечение в психиатрическом или неврологическом стационаре.
• Донорство крови, тканей, спермы.
• Работу в сфере услуг, торговли, медицины, социальной и образовательной сферах.

Кровь на RW сдается натощак, последний прием пищи должен быть не позднее 6 часов до анализа. Медицинский работник проводит забор 8-10 мл крови из локтевой вены. Для младенцев забор осуществляется из черепной или яремной вены.

За 1-2 дня до анализа следует прекратить употребление алкоголя и жирной пищи, которые могут исказить результат. Также рекомендуется воздержаться от приема препаратов наперстянки.

Результат анализа может быть ложным, если:

• у пациента повышена температура,
• он болен инфекционным заболеванием или только что переболел,
• у женщины менструация,
• беременная в последние недели перед родами,
• прошло 10 дней после родов,
• младенец в первые 10 дней жизни.

Реакция Вассермана

Тест для диагностики сифилиса был разработан немецким иммунологом в 1906 году и позволяет выявить начальные стадии болезни — первичный и вторичный сифилис. Ранее он был обязательным для всех категорий населения.

Классический тест не отличался высокой достоверностью и был отменен в России с 2006 года.

Вместо RW-анализа крови стали использовать реакции связывания комплемента, включая МП-тест или микрореакцию преципитации.

Некоторые лаборатории продолжают применять РВ-реакцию для диагностики скрытого и вторичного сифилиса, а под названием «RW-анализ» часто подразумевают метод микропреципитации.

Когда назначают анализ на РВ

Кровь на реакцию Вассермана (РВ) исследуют:

• при профессиональном осмотре для устройства на работу;
• при сдаче крови или спермы донорами;
• во время беременности.

Во время беременности анализ на RW сдают трижды, чтобы предотвратить развитие врожденного сифилиса у плода. Бледная трепонема передается через плаценту от зараженной матери и поражает все органы плода. Внутриутробное заражение часто приводит к гибели малыша на седьмом месяце беременности.

Чтобы снизить риски для развития плода, беременные женщины сдают анализ на RW:

• при постановке на учет;
• на 30-й неделе;
• перед родами.

Показаниями для сдачи крови на реакцию Вассермана являются:

• наркомания;
• контакт с инфицированными бледной трепонемой;
• случайный незащищенный половой контакт;
• срочная госпитализация с признаками инфицирования;
• заключение в тюрьме;
• увеличение лимфатических узлов неясного происхождения с высокой температурой.

Сегодня анализ на RW заменен более точными методами диагностики. Реакция Вассермана часто дает ложноположительные результаты и не всегда определяет наличие инфекции на третьей стадии сифилиса.

Суть метода

Для классического исследования необходимы:

• образец венозной крови больного — 8–10 мг из локтевой вены;
• кардиолипин — фосфолипид, полученный из митохондрий сердца быка.

Кардиолипин входит в состав внутренних мембран митохондрий различных животных и присутствует в клетках бледной трепонемы Treponema pallidum.

При попадании трепонемы в кровь кардиолипин становится антигеном, к которому иммунная система человека вырабатывает антитела.

В образце крови зараженного человека обнаруживаются антитела к кардиолипину. Для RV анализа кардиолипин, полученный из сердца быка, помещают в пробирку с образцом крови.

Если антитела к фосфолипиду присутствуют, они взаимодействуют, и реакция считается положительной.

Степень взаимодействия показывает количество антител в образце и уровень поражения сифилисом.

При отсутствии взаимодействия RW-тест считается отрицательным.

Кардиолипин не является специфическим антигеном для трепоном. Он также может взаимодействовать с антителами, вырабатываемыми при других инфекционных заболеваниях.

Подготовка к анализу на РВ

Анализ на РВ проводят натощак, утром. Для классического РВ-исследования необходим образец венозной крови.

Подготовка к анализу важна для избежания ложноположительных результатов. Необходимо воздержаться от пищи за 6 часов до сдачи крови.

За сутки до исследования нельзя употреблять жирную и жареную пищу, а также спиртные напитки.

Прием некоторых лекарств, например, наперстянки, и введение сывороток могут исказить результаты.

Женщинам во время менструации рекомендуется воздержаться от теста, так как в этот период возможны искажения реакции. Анализ не следует проводить при повышенной температуре или инфекционном заболевании.

Когда будет готов анализ

Антитела к кардиолипину можно обнаружить в крови уже через 2 дня после теста на реакцию Вассермана. Степень заражения и количество возбудителя болезни определяются через неделю после сдачи крови.

Лучше всего доверить расшифровку теста на РВ врачу и не пытаться самостоятельно интерпретировать результаты, чтобы избежать ненужного беспокойства в случае ложноположительного ответа лаборатории.